นักวิจัยที่ศึกษาถุงนอกเซลล์ (EV) มักเผชิญกับความท้าทายที่เกี่ยวข้องกับการกำหนดมาตรฐาน ความสามารถในการทำซ้ำ และความไว เครื่องมือที่เชื่อถือได้และรีเอเจนต์คุณภาพสูงถือเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการค้นพบที่ก้าวล้ำในด้านการสื่อสารระหว่างเซลล์ที่ซับซ้อน
แม้ว่าเกล็ดเลือดจะเป็นชิ้นส่วนเซลล์เล็กๆ ในเลือด แต่ก็มีสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่อุดมสมบูรณ์ และมีบทบาทสำคัญในการสร้างและการควบคุมการทำงานที่แปลกใหม่ เอ็กโซโซมที่ได้มาจากเกล็ดเลือดของมนุษย์ได้รับการคัดเลือกมาอย่างระมัดระวังจากผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี โดยจะถูกแยกและทำให้บริสุทธิ์โดยใช้เทคนิคการกรองการไหลตามแนวเส้นสัมผัสขั้นสูง (TFF) และเทคนิคโครมาโทกราฟีแบบแยกขนาด (SEC) เอ็กโซโซมเหล่านี้ยังคงรักษาคุณสมบัติทางชีวภาพโดยธรรมชาติ ทำให้เหมาะสำหรับการศึกษาฟังก์ชันของ EV ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมเชิงบวก และปรับเทียบวิธีการวิเคราะห์
เพื่อเพิ่มกิจกรรมและความคงตัวในระดับสูงสุด กระบวนการไลโอฟิไลเซชันขั้นสูงจะขจัดความชื้นได้อย่างมีประสิทธิภาพ โดยยืดอายุการเก็บได้นานถึง 24 เดือน โดยไม่ต้องใช้การเก็บรักษาแบบโซ่เย็นที่เข้มงวด (แนะนำการจัดเก็บที่อุณหภูมิ 4°C) ความมั่นคงในระยะยาวนี้ช่วยลดความยุ่งยากในการวางแผนการทดลองและการจัดการสินค้าคงคลัง ขณะเดียวกันก็รับประกันการเข้าถึงวัสดุการวิจัยคุณภาพสูงอย่างสม่ำเสมอ
เอ็กโซโซมที่ถูกทำแห้งเยือกแข็งเหล่านี้ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมเชิงบวกที่เชื่อถือได้สำหรับเทคนิคการวิเคราะห์ EV ต่างๆ ด้านล่างนี้เป็นแนวทางการใช้งานที่แนะนำ (อาจจำเป็นต้องมีการปรับเปลี่ยนตามเงื่อนไขการทดลองเฉพาะ):
| เทคนิคการใช้งาน | ปริมาณที่แนะนำ |
|---|---|
| การวิเคราะห์การติดตามอนุภาคนาโนเรืองแสง (F-NTA) | 1ไมโครกรัม |
| โฟลว์ ไซโตเมทรี | 5ไมโครกรัม |
| เอลิซา | 10-20ไมโครกรัม/หลุม |
| เวสเทิร์นบล็อท | 10-20ไมโครกรัม/เลน |
การหมุนเหวี่ยงด้วยความเข้มข้นสูงพิเศษและ EV ที่แยกด้วย TFF ถูกย้อมโดยใช้ชุดตรวจจับเตตร้าพานิน F-NTA EV และวิเคราะห์ด้วย ZetaView® x30 ซึ่งแสดงให้เห็นลักษณะเฉพาะระดับนาโนที่แม่นยำ การตรวจสอบความถูกต้องเพิ่มเติมโดยใช้รีเอเจนต์การตรวจจับ F-NTA CD9, CD63 และ CD81 ยืนยันรูปแบบการแสดงออกของเครื่องหมายเฉพาะใน EV ที่ได้มาจากเกล็ดเลือด